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技术文章

ELISA竞争抑制法普遍存在的操作问题


点击次数:761 发布时间:2013-03-24

两对半使用ELISA方法,其中HBsAgHBsAbHBeAg使用双抗原/抗体夹心法检测,而HBcAbHBeAb使用竞争抑制法检测。

 
而竞争抑制法的原理:酶标抗体与样本抗体在同样的体系中,与固相抗原竞争结合是等比关系。原论上讲,应该先将样本与酶标抗体先行混匀,然后加入反应也进行。但实际工作中并非如此,都是分开加入反应孔。这样会造成先加入的先结合,与后加入者并不是公平的关系,因而也不符合等比原则。特别是在放置时间长,且温度高的情况下,对结果有很大的影响。
 
第二军医大学长海医院对此造成的影响进行了研究。将阴性标本94份并用生理盐水进行130稀释,在加入标本后按下表时间放置后再加入酶标抗体,然后检测结果如下:
 

放置时间(min
阴性标本数
临界值-标本A450nm
假阳性率(%)
<0.3
0.3~0.7
>0.7
0
75
10
3
6
0
2
68
13
7
6
7.4
5
65
15
8
6
10.6
10
56
16
12
10
20.2
20
38
18
17
21
39.3
30
21
12
18
43
57.4


从上表可以看出,如果同时加入标本与酶标抗体,没出现假阳性现象。2分钟后再加入酶标抗体,由于标本比酶标抗体先结合了两分钟,因此出现了7.4%的假阳性。30分钟后再加,假阳性高达57.4%。因此建议竞争抑制法的项目,加十个样本后立即加酶标抗体,这样对检测结果没有影响。
 
 
 
 
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