首页 公司简介 产品展示 热卖产品 公司新闻 技术文章 人才招聘 资料下载 联系我们
产品搜索
主营产品: ELISA试剂盒、生化试剂、重组蛋白、细胞因子、抗体、中药对照品。
服务电话
400-002-6926
15900443528
点击这里给我发消息
点击这里给我发消息
点击这里给我发消息
点击这里给我发消息
产品目录 更多...
酶联免疫检测(ELISA)试剂盒
实验室耗材
 
 
推荐产品 更多...
48T/96T人葡萄糖激酶(GCK)ELISA kit
48T/96T人多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)ELISA kit
48T/96T人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP)ELISA kit
48T/96T人胸苷酸合成酶(TS)ELISA kit
48T/96T人基质金属蛋白酶11(MMP11)ELISA kit
 
 
联系我们
公司:上海瑶韵生物科技有限公司
联系人:黄先生
手机:15900443528、18917067275
电话:400-002-6926、86-021-34535391
传真:86-021-34535391
地址:上海闵行区绿莲路100弄
邮编:
网址:www.yaoyunbio.com
邮箱:912529879@qq.com
 
 
技术文章

ELISA的质量控制


点击次数:791 发布时间:2013-04-02

      从1949年美国College of American Pathologists(简称CAP)首先开始研究临床实验室室内质量控制(简称质控)问题,美国学者Levery和Jenn ing于1950年发表*篇关于使用质控图的实验室室内质控,临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。


    到70年代,实验室质量控制进入一个新的阶段--全面质量管理,推行Good Laboratory Parctice(简称GLP)。进入80年代末期,GLP的统一标准产生了,发展到"认证实验室"管理阶段。


    全面质量管理的宗旨在于预防差错的产生。质控图的统计学质控的目的是检出差错。统计学的实验室室内质控是全面质量管理中的一个重 要环节。


    本章节主要介绍免疫学检验的统计学室内质控方法。因为ELISA是目前临床上zui常用的一种免疫学检验方法,就以ELISA检验为例,介绍一下有关问题。


    卫生部临床检验中心免疫质控室从 1988年开始在全国范围内开展乙肝标志物检验的质量评价活动,一直采用这一套质量评价方法,并在实践中不断实践、提高和完善, 希望能找出一条适合中国国情的,行之有效的质量管理的道路。


5.1 基本概念


5.1.1 质量控制(Quaility Control,Q.C)


    质量控制是监视全过程,排除误差,防止变化,维持标准化现状的一个管理过程。这一过程是通过一个反馈环路进行的。
  1)确定控制的对象;
  2)规定控制对象的标准(预期值);
  3)制定或选择控制方法和手段;
  3)测量实际数据;
  4)比较或较对实际数据与预期值之间的差异,并说明产生这一差异的原因。超出预
    定误差范围,报警系发出信号,反馈通道中断。
  5)采取行动,解决差异。恢复原状(原标准状态)的手段发挥作用。


    质量控制主要采用质控图进行。质控图是把某一检验的性能数据与所计算出来的预期的 "控制限"进行比较的图。这种性能数据是在按规程正常进行时,按时间顺序而抽选出来的,其目的是检测检验过程中变异的"可追查" 性原因。"可追逆"性的误差原因,是指除去随机误差以外的其他原因。"控制限"是通过统计计算出来的,在后我们将详细介绍(见5 .3.室内质控程序)。


5.1.2 误差


    实验误差分为三种:系统误差、随机误差和过失误差。


    系统误差是指一系列测定结果与真值或靶值存在有同一倾向的误差,有明显的规律性,可在一定条件下重复出现,是可以通过质控预防和 校正的。


    随机误差又称偶然误差,是一种偶然的、未能预料到的误差,是难以避免和校正的误差。检验工作中随机误差的分布符合正态分布规律。


    过失误差是人为的责任误差。通过加强实验室管理和开展质量控制工作是可以避免的。


5.1.3 正态分布及标准差


    ELISA试验中,检验同一样本达20次以上时,就会发现这组数据(指测定结果的吸光值)分布在均值两侧,大部分集中在均值附近 。如果以测定值为横坐标,以出现的频率为纵坐标作图,就可绘出一个呈钟形的曲线图。如图5-1,钟顶处为均值,其他值以均值为中 心对称分布,这就是正态分布。


    正态曲线以下的面积称概率,常用样本的均数(X)和标准差(SD)来表示,其计算方法如下:

  均值、标准差和概率的关系如下:
  X±1SD,概率0.68    X±2SD,概率0.95    X±3SD,概率0.99


    换言之,当 ELSIA检测同一样本达一定次数后所得的一组数据,其中靠近均值(X)的±1SD范围内的数据,占该组数据的68%,在X±2 SD范围内分布的数据占总体的95%,在X±3SD范围内分布的数据占总体的99%。当我们要求检验结果在X±2SD范围内为合 格时,将有95%的数据可能合格。


5.1.4 真值


    用确切的、的决定性方法测得的值,称为真值。真值一般是测不到的。通过可靠的决定性方法测出的值,称为靶值,通常用靶值来 表示真值的大小。


5.1.5 准确度(accuracy)


    是指测定结果与真值(或靶值)接近的程度。准确度不能以数字表示,往往用不准确度来衡量。测定结果与靶值的偏离程度称为偏差,它 表示该项检验的不准确度。
  偏差=检验的均值-真值(或靶值)
  相对偏差=偏差真值÷(或靶值)×100%


5.1.6 精密度(Precision)

 
    是指对同一样本重复测定时,每次测定结果与平均值的接近程度,即重复测定值之间的符合程度。


5.1.7 标准品


1、标准品由WHO或相应组织标定的,用肯定的、公认的、准确的物理或化学方法测定的定值材料。


2、生物学活性标准品根据生物学反应由WHO或相应组织标定的活性单位的材料。


3、参考标准血清国家标准化组织根据标准化生产的法定材料。可用于鉴定仪器和鉴定方法准确性。


5.1.8 临床决定性水平(clinical decision leuel)


    当某个被测物的浓度达到某一水平时,临床医师必须采用医疗措施。被测物的这浓度称为临床决定性水平。


5.2质量控制血清


    质控血清是已有靶值的血清,在每次的常规检验中加入一份或数份,通过所得结果来了解本次检验的情况。质控血清检验的结果如能控制 其误差在一定范围内,就说明该检验没有发生不允许的误差。如果出现超过允许误差范围的异常结果,提示该检验不合格,应寻找原因, 纠正后,重检待测标本。因此质控血清在质控工作中起重要作用。


5.2.1 质控血清的使用


    卫生部临床检验中心制备的乙肝标志物质控血清,可以在 -20℃保持半年定值不变。冰冻状态融化使用时,应先混匀,未用完部分可在4℃保存5天。不宜反复冰融或自行分装。开展某项检验 的室内质控工作需要的质控血清,一般按3-6个月用量准备。自制的不定值质控血清,在一批质控血清将用完之前,需准备下一批质控 血清。质控血清要求性能稳定,较长期内效价不变,其理化性质应与病人样本相近,这样才能有效地起到监测作用。


5.2.2 临界值质控血清


    质控制血清分定值和未定值两种。如只用一份质控血清定值,一般定在正常值与异常值交界点上,定性测定时处于弱阳性水平,称为临界 值。乙肝标志物临界值的制定,应按临床要求,为临床提供统一的判断弱阳性的标准。临界值质控血清可以作为试剂盒中的阳性对照品和 阴性对照品以外的第三个对照品,它可以灵敏地反映出试剂盒的检出水平,确保弱阳性反应的标本不漏检。


5.2.3 质控血清的制备


    每个实验室可以根据自己的条件,选用临床中心提供的质控血清,或按以下方法自己制备
本室使用的质控血清(以乙肝质控血清为例)。


1) 收集新鲜的无溶血、无黄疸、无细菌污染的阳性血清。
2) 56℃加热10小时来活。
3) 离心或过滤除去沉淀。
4) 用10%的小牛血清或正常人血清(PBS缓冲液)将收集的血清稀释至所需的浓度。如能用正常的人血清稀释更好,因其成份更接近于检测标本。
5) 抽滤除菌。按一次使用的量分装小安瓿,封口,20℃保存备用。不可反复冻融。
    被检物要求检出的水平常被认为是质控血清应选择的水平。如果该试验还有其它要求,则应加所要求浓度的质控物。
6) 标定含量。20-30次测定结果删除>±2SD数据的均值作为靶值,并与已知定值血清对比测定。


5.3 室内质量控制程序


    临床检验的检测结果,每次或每天之间不可能没有误差。决定允许的误差范围,以临床上不造成误诊与漏诊为准,通过以下步骤来确定质 控范围。
1) *条件下的测定误差。
2) 已知值的血清在常规检验条件下的误差。
3) 未知值的血清在常规检验条件下的误差。
4) 临床应用的要求。对任何一个试验都应确定一个允许的误差范围,前题是满足临床要求。如允许误差定得过小,在临床上不存在任何意义 ,但为了符合该规定却要花费很大人力、物力和时间。相反,如果将允许误差定得过大,将使监测系统察觉不到临床上要求检出的误差, 失去质控的意义。


5.3.1 *条件下已知值质控血清变异(optimal conditions variance,简称OCV)的测定


    在本实验室*条件下(包括操作者、试剂、仪器等)检测质控血清20-30次,测得结果计算,求出该组数据的均值和标准差(SD)表示该实验室的*工作质量。


    现举例说明HBsAg ELISA法检测时OCV的测定。使用的质控制血清为临界血清,HBsAg浓度为5ng/ml。在该实验室中选择素质、操作 zui熟练的技术员进行认真地专门测定,选用*的试剂盒,检测之前,将恒箱、加样器等认真校正、调校正、调试,使用新的加样吸头等 ,即在*、的条件下进行检测。除质控血清外同时测定阴性对照品和阳性对照品。并作双份测定,得出2个吸光值(A值),求 出X。连续作20次,求出20个X,即X1……X20。从这20个数据中,求出OCV的X和SD。


5.3.2常规条件下已知值质控血清变异(routine conditions variance-known value,简称RCVK)的测定。


    做常规检验的技术人员,在常规检验的条件下,将质控血清放在常规检测样本中,进行 20次检验,结果计算同OCV法。一般认为RCV的SD在OCV的SD两倍范围内可以接受。若太大应该查找原因,使其向OCV的 SD值靠近。在改进实验室条件后(例如较正加样器,纠正洗板操作,调正温育温度等),重新进行RCVK的测定。如果RCVK的S D值更小,说明OCV不是*条件下测定的,应重新再测OCV。常规条件下,RCVK肯定要比OCV大。通过质控控制各项条件, 使RCVK的数据尽可能接近OCV值。RCVK的数据反映该实验室日常工作的质量,用于作质控图,对室内检验的结果进行控制,每 日检验的结果,报告能否发出。


5.3.3常规条件下,未知值质控血清变异(routine conditions variancl-unknown value 简称RCVU)的测定


有时为了避免主观性,再作RCVU测定。


    测定步骤同 RCVK,但检测的操作者不知质控血清的定值,或在操作者不知哪份是质控血汪清的条件下进行常规检验,以排除操作者的主观性。在 此不再举例说明。


5.3.4质控图


    通过以上三步骤,可以开始作室内质控图,根据 RCVK的和SD作质控框图。利用质控图可以对每次检验的结果进行监测,当没有更换另一批号试剂盒和另一批号质控血清时,该质控 图可以连续作下去。


    质控血清的S/CO值低于-2SD的范围,属"告警",应寻找原因并在质控图上记录查出的原因。


    ELISA试验中,各种检验项目的误差允许范围均有待在实践中得出结论,以上只是举例说明质控方法,不是定论。2SD是一般公认 的允许误差限度。每批测定放一份质控血清时,一次超过2SD应作为"告警",二次超出2SD为"失控"。当质控过程中,出现失控 时,出现失控时,应查找原因,通常是试剂盒或质控血清失效造成。更换试剂盒或更换质控血清,找出原因纠正后重新检验。如果检验结 果仍达不到要求或找不到原因时,应重复进行OCV的检验。如果OCV检验的结果仍是好的,说明常规操作出现问题。一般认为:①一 次超出3SD;②连续二次超出2SD;③3-5次连续处于一侧的2SD之内;④5~7次连续偏向横轴的一侧,均为失控。第③、④ 种情况,单独依靠记录往往是不易察觉的,但在质控图上可以清晰地发现这种失控。


5.3.5统计学计算方法--"即刻性"质控


    以上介绍的质控方法基本上与临床化学测定的质控方法相同,但 ELISA有其特殊性,zui合适的质控方法尚待研究建立。有些实验室不是每天进行ELISA项目的检验,而ELSIA试剂盒效期短 ,用一批号试剂盒连续常规测20次,难度较大。采用"即刻法"质控统计方法,只需连续测3次,即可对第3次检验结果进行质控。" 即刻法"的建立具体计算方法如下:
1)先将测定值从小到大排列
2)计算X和SD。
3)计算SDI上限和SDI下限值。
4)将SDI上限、SDI下限值与SDI值中的数字比较。


    当 SDI上限值和SDI下限值<n2SD时,表示处于控制范围内,可以继续往下测定,继续重复以上各项计算;当SDI上限和SDI 下限有一值处于n2SD和n2SD值之间时,说明该值在2SD~3SD范围,处于"告警"状态;当SDI上限和SDI下限有一值 >n2SD时,说明该值已在3SD范围之外,属"失控"。数值处于"告警"和"失控"状态应舍去,重新测定该项质控血清和病人样 本。舍去的只是失控的这次数值,其他次测定值仍可继续使用。


即刻性质控统计方法,适于ELISA测定的质控。


    当检测的数值超过 20次以后,不必再使用"即刻法"质控统计计算,可以转入常规的质控图的质控。将前20次的数值求出的和SD作质控框架图,第2 1次的数值,依次点入即可。


5.4室间质量评价(external quality assessment,简称EQA)


    室间质量评价简称室间质评,是由质控中心采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果,并发现室内质控不易发现的不准 确性,了解各实验室之间结果的差异,并帮助校正,使具有可比性。各实验室试验结果报到质控中心,经过统计分析,得出相互比较的结 果。这种评价不能控制各实验室每天发出的检验报告,而是一种回顾性评价。室内质控主要监测试验结果的精密度,而室间质评主要控制 试验结果的准确度,不能互相替代。参与质评的实验室应先做好室内质控。


5.4.1室间质评的方法


1、 发质控物进行调查


    这是国内外室间质评的常用形式。部临检中心对乙肝标志物 ELISA检验的室间质评采用定期发放质控物至各实验室,各实验室在规定的日期进行检验,并将检验结果报至部临检中心。部临检中 心经统计分析,将评价结果寄回各实验室。通过评价,各实验室了解本室工作质量,发现差距,并设法改进,以不断提高检验质量。


    这种评价方式有一定缺点,即各实验室常对质控物特殊对待,在检验时选用特殊试剂盒,选派特别的技术员进行检验,有的实验室互相和 对结果并作修改。这就使EQA的结果不能反映该实验室日常工作水平。


2、 派观察员到实验室进行试剂调查


    这种调查事先不通知,临时派观察员到实验室,采用常规方法,检验规定的一组标本,进行评价。


    这种调查方式,容易发现该实验室存在的实际问题,可以直接给予指导和帮助,解决问题,提高检验质量。这种调查通常可以使用真实样 本,避免采用质控物的一些缺点。 

 
 
 
首页 | 公司简介 | 产品展示 | 热卖产品 | 公司新闻 | 技术文章 | 人才招聘 | 资料下载 | 联系我们
上海瑶韵生物科技有限公司 版权所有 地址:上海闵行区绿莲路100弄
联系人:黄先生 电话:400-002-6926、86-021-34535391 手机:15900443528、18917067275 传真:86-021-34535391 邮编: 邮箱:912529879@qq.com
技术支持:安防展览网 管理登陆 ICP备案号:沪ICP备13007406号-1

安防展览网

推荐收藏该企业网站