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技术文章

抗血清鉴定


点击次数:702 发布时间:2013-04-05

抗血清的质量直接影响分析方法的特异性和灵敏度。用于鉴定抗血清质量的参数主要有几项:

 
    1.亲和性(affinity)  是指抗体分子上一个抗原结合部位与相应的抗原决定簇之间的结合强度,常用亲和常数Ka表示。Ka是正/逆向反应速度常数的比值,单位为稀释度单位(L/mol或LM-1),表示需将lmol抗体稀释至多少升,才能使抗原—抗体结合下降50%;而Ka的倒数为解离常数(Kd),其单位为浓度单位(mol/L)。为提高放射免疫分析的灵敏度、精密度和准确度,需选用Ka值高(109一1012L/mo1)的抗血清。
 
    2.特异性(specificity)  是指一种抗体识别相应抗原决定簇的能力。由于一种抗原常有结构极相似的类似物(同类物、前体、降解物和代谢物),其抗血清可能对该抗原的类似物产生交叉反应。因此,抗体的特异性通常以交叉反应率表示:将反应的zui大结合率抑制下降50%时特异性抗原与类似物的剂量(ED50)之比来计算交叉反应率。如胰岛素标准品使125I胰岛素与抗血清的zui大结合下降50%的用量为0.5ng,而类似的物(前体)胰岛素原的用量为500ng,则相应的交叉反应率(%)为:0.5/500=0.1%。
抗体交叉反应程度的高低直接影响测定结果的准确性,但应注意,抗血清特异性与分析方法特异性并不完全相同,因后者对某一待测抗原的特异性程度不仅取决于所用抗体,尚有赖于标记物的质量和方法学设计。
 
    3.效价(titer)  是反映抗血清中有效抗体含量的相对参数,即抗血清稀释至能与抗原发生有效反应的zui大稀释度。通常是将一株抗血清作系列稀释后与标记抗原反应,计算不同稀释度时抗体结合标记抗原的百分率,绘制出抗体稀释度曲线。结合具体方法设计要求。效价一般指结合50%标记抗原时,抗血清的稀释度。
 
 
 
 
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