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技术文章

ELISA(双抗体夹心法)—检测HBsAg


点击次数:823 发布时间:2013-04-26

        以已知抗体(抗HBs)包被载体,然后将含有抗原的待检标本加入,共同孵育后,抗原结合于包被抗体上,再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs),酶标抗体连接到抗原上,zui后加入底物溶液,根据颜色反应来判定抗原含量。
【材料】HBsAg试剂盒,本试剂盒含:

1、包被抗-HBs反应条

1瓶

2、酶结合物

1瓶

3、HBsAg阳性对照

1瓶

4、HBsAg阴性对照

1瓶

5、洗涤液:用前每瓶作1:20稀释

1瓶

6、显色剂(TMB)A

1瓶

7、显色剂(TMB)B

1瓶

8、终止液

1瓶

【方法】
1、加入待测标本每孔0.05ml,并设HBsAg阳性对照2孔,HBsAg阴性对照2孔,空白对照1孔,然后加入酶结合物每孔1滴(0.05ml、空白对照孔不加),充分混匀后置37℃孵育30分钟。
2、洗板:弃去反应条孔内液体、拍干、用洗涤液注满每孔,弃去拍干,反复五次后拍干。
3、显色剂:先加显色剂A每孔1滴(0.05ml),然后再加显色剂B每孔1滴(0.05ml),混匀,37℃孵育10分钟。
4、每孔加终止液1滴(0.05ml),混匀。
【结果】
比色法:波长450nm,先用空白孔校零点,然后读取各孔光密度值。
样品OD值/阴性对照平均OD值≥ 2.1判断为阳性,否则为阴性。
备注:阴性对照平均OD值低于0.05作0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。阳性对照OD值≥0.8,实验结果有效。
【注意事项】
1、试剂盒置2℃~8℃保存。
2、使用前试剂应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加。
3、从冷藏环境中取出试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔条,置室温平衡30分钟后再行测试,余者应及时封存于冰箱中以备后用。
4、待测标本不可用NaN3防腐。
5、不同批号试剂请勿通用。
6、结果判断须在10分钟内完成。
7、若浓缩洗涤液出现结晶时,请置37℃至溶解。

 
 
 
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