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技术文章

大鼠单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)ELISA试剂盒说明书


点击次数:472 发布时间:2013-10-26

本试剂盒仅供研究使用。
产品名称:大鼠单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)酶联免疫试剂盒
使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、相关组织液中单核细胞趋化蛋白-1 的含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平。用纯化
的大鼠单核细胞趋化蛋白-1 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入单
核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),再与HRP 标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复
合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的
作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠单核细胞趋
化蛋白-1(MCP-1)的含量。
试剂盒组成
1 20 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液3ml×1 瓶
2 酶标试剂3ml×1 瓶8 标准品(900ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×4 条9 标准品稀释液1.0ml×1 瓶
4 样品稀释液3ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液3ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液3ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本处理及要求
1.血清、血浆标本可直接测定;
2.尿液、脑脊液、腹腔液:2000-3000 转/分离心10 分钟后,取上清液待测。
3. 不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
4.采集后尽早进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反
复冻融。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上按序设标准品孔10 孔,在*、第二孔中分别
加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;再各取100μl 分
别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后,在第
三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉;再各取50μl 分别加到第五、第六孔中;再在第五、
第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加
到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、
第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,
混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。( 稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为 600
ng/L,400 ng/L ,200 ng/L,100 ng/L,50 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
2
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样
品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD 值为纵坐标(普通坐标),在坐标纸上绘出
标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的
浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品
浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值
大于标准品孔*孔OD 值的1.5 倍),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测
定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 严格按说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
6.本试剂不同批号组分不得混用。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.底物请避光保存。
检测范围:
30 ng/L -700 ng/L
规格:
48 人份/盒
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月

 
 
 
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