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猪细小病毒抗体(PPV-Ab)ELISA试剂盒说明书 |
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点击次数:890 更新时间:2013-11-11 |
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断 猪(Porcine)细小病毒抗体(PPV-Ab)ELISA检测试剂盒使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先 包被猪细小病毒(PPV)抗原的包被微孔中,依次加入标本、HRP标 记的检测抗原,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧 化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。 用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),与CUTOFF值相比较, 从而判定标本中猪细小病毒抗体(PPV-Ab)的存在与否。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞 刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地 分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟 取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于 -20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 1. 酶标仪(450nm) 2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶*溶解 后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。3. 预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到 试剂盒的的*检测效果。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无 阴性对照0.5mL 0.5mL 无 阳性对照0.5mL 0.5mL 无 检测抗原-HRP 10mL 5mL 无 20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释 样本稀释液6mL 3mL 无 底物A 6mL 3mL 无 底物B 6mL 3mL 无 终止液6mL 3mL 无 封板膜2 张2 张无 说明书1 份1 份无 自封袋1 个1 个无 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20 稀释,即1 份的20×洗涤缓 冲液加19 份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min 后甩尽 孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5 次。 2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。 操作步骤 1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封 袋密封放回4℃。 2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔,阴、阳性对照孔中加入阴性对照、 阳性对照各50μL; 3. 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL; 4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP) 标记的检测抗原100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温 箱温育60min。 5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去 洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5 次(也可用洗板机洗板)。6. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50μL,15min 内,在450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 结果判断 1. 试验有效性:阳性对照孔OD 值平均值≥1.00; 阴性对照孔OD 值平均值≤0.15。 2. 临界值(Cut off)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 3. 阴性判断:样品OD 值<临界值(Cut off),样品为阴性 4. 阳性判断:样品OD 值>临界值(Cut off),样品为阳性 试剂盒性能 1. 准确性:阳性对照孔OD 值平均值≥1.00;阴性对照孔OD 值平均 值≤0.15,说明试验结果有效。 2. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 3. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。 4. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。 5. 有效期:6 个月 免责声明 1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所 产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。 2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者 承担。 |
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