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技术文章

ELISA法检测白细胞介素-4


点击次数:682 发布时间:2014-01-12

        白细胞介素-4(1L-4)是Th2细胞分泌的一类重要细胞因子,可促进巨噬细胞的黏附,介导IgE的产生,在局部炎性细胞浸润中发挥作用,同时IL-4可使IgE受体表达增强,诱导嗜酸细胞聚集和迁移。

    [检测方法]  ELISA

    [方法学原理]  在微孔反应板上包被抗人IL-4单克隆抗体,待测标本和标准品中的IL-4会与抗人IL-4单克隆抗体结合,游离的成分被洗去,同时加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素与亲和素特异结合,抗人IL-4抗体与结合在单克隆抗体上的人IL-4结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色剂,若反应孑L中有IL-4,HRP会使五色的显色剂呈现蓝色,加终止液变黄色。在波长450nm处测吸光度,IL-4浓度与吸光度成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中的IL-4浓度。

    [标本准备]  静脉血2ml,不抗凝。

    [试剂]

    1.预包被微孔反应板

    2.浓缩酶结合物

    3.酶结合物稀释液

    4.标准晶和标本稀释液

    5.浓缩生物素化抗体

    6.IL-4标准品

    7.浓缩洗涤液

    8.显色剂A、B

    9.终止液

    [仪器]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。  

    [检测步骤]

    1.在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品100ul,再加生物素化抗体.工作液50ul。

    2.振荡混匀,置20~25℃环境中温育120min。

    3.将孔内液体吸干,用洗涤液充分洗涤5次,干燥。

    4.除空白孔外,加入酶结合物工作液100ul。

    5.振荡混匀,置20~25℃环境中温育30min。

    6.将孔内液体吸干,用洗涤液充分洗涤5次,干燥。

    7.每孔加入显色剂A、B各50fA,轻轻振荡混匀,37℃环境中避光显色10min。

    8.加入终止液50tA后,轻轻振荡混匀。用酶标仪(450nm波长)测定各孔吸光度,与标准曲线对照,求出IL-4水平。

    [正常参考值]  务实验室可根据检测方法的不同确立正常参考值范围。

    [注意事项]

    1.试剂盒从冷藏环境中取出时应在室温环境中平衡30min后方可使用,未用完的微孔条用自封袋密封保存。

    2.酶标板洗涤时各孔均需加满洗涤液,防止孔内有游离酶不能洗净。应设定30—60s的洗涤浸泡时间。

    3.滴加试剂前应将滴瓶翻转数次,使液体混匀。滴加时瓶身应保持垂直,以使滴量准确(注意:勿将试剂滴在孔壁上)。

    4.所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2mol/L硫酸,使用时应注意安全。

    5.每批样本应同时做标准曲线。

    6.若标本OD值在标准曲线测定范围以外,应适当稀释后重测。

    [临床意义]  IL-4能促使静止的B细胞表达MHC亚类分子,增强淋巴细胞的抗原呈递能力,增强巨噬细胞的吞噬功能,而且对淋巴细胞的迁移也具有一定意义。

 
 
 
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