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兔抑癌基因p16 免疫组化试剂盒说明书


点击次数:735 发布时间:2014-03-19

保存方法:2-8℃保存。     有效期:一年。     生产日期:见封口。

工作原理:

辣根过氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不会遮盖抗原的结合部位,具有较高活性及特异性,可溶性佳,生成的产物不扩散,可作用于多种底物,产生不同颜色且HRP穿透力强,易进入细胞内。DAB H2O2存在的情况下,可以作为HRP的电子供体,产生褐色的不溶颗粒,可作为显色的试剂。

试剂盒内容:

 

名称

规格

1

0.01mol/L pH6.0枸橼酸盐缓冲液

0.5L

2

PBS缓冲液

1L

3

广谱二抗

1.5mL

4

30%H2O 2

5mL

5

DAB显色液I

0.3mL

6

DAB显色液II

0.3mL

自备试剂:无水乙醇、苏木素。

操作步骤

1. 60常规脱蜡至水后,将石蜡切片先后浸入二甲苯,二甲苯10min。然后逐级降浓度酒精入水,每次3-5 min

无水酒精

35min

90% 酒精

35min

85% 酒精

35min

75% 酒精

35min

PBS洗涤3

每次5 min

  1. 热修复抗原: 将切片置于0.01mol/L pH6.0枸橼钠缓冲液,微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10 min后,反复1-2 次,置于室温自然冷却。0.01 mol/L  pH7.0左右PBS洗涤3次,每次5 min
  2. 消除内源性过氧化物酶:3% H 2 O 2 室温孵育 5-10 min,以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次,每次5 min

4.滴加一抗: 滴加适当稀释的一抗到切片上,37孵育一定时间或者4℃到第二天清晨 pH7.4PBS洗涤3次,每次5 min 。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)

  1. 加入广谱二抗,37℃孵育一段时间,取出后PBS洗涤3次,每次5 min
  2. DAB显色: DAB显色液III50微升加至入1mL的水中,配成DAB工作液,滴加到切片上,室温显色镜下控制反应时间。若无背景出现则可继续显色。蒸馏水充分洗涤以终止反应。
  3. .观察显色后自来水冲,苏木精复染1-2min,,自来水冲10min,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,干燥,分析拍照
 
 
 
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